Réponses inné, T et B dans les patients Zika humains aigus

Réponses inné, T et B dans les patients Zika humains aigus

Il existe un besoin urgent d’études sur la persistance virale et l’immunité lors des infections à Zika chez l’homme pour guider la planification et la conduite des essais cliniques des vaccins. Chez les voyageurs américains retournés présentant une infection symptomatique aiguë, les caractéristiques cliniques, les taux viraux d’ARN et les réponses immunitaires ont été caractérisés. patients expérimentés avaient l’ARN viral persistent dans le plasma pour & gt; et & gt; Trois jours après l’apparition des symptômes, des augmentations transitoires des monocytes pro-inflammatoires ont débuté, suivies de diminutions transitoires des cellules dendritiques myéloïdes. L’immunoglobuline M du virus Zika a été détectée au lendemain de l’apparition des symptômes, persistait au bout de plusieurs jours et demeurait équivoque. les plasmablastes et les anticorps neutralisants se sont développés rapidement; Plasmablastes spécifiques du virus de la dengue et anticorps neutralisants à titres élevés développés uniquement chez les patients expérimentés chez les flavivirus Les lymphocytes B spécifiques du virus Zika et du virus de la dengue développés chez des patients naïfs de flavivirus et des patients expérimentés ont été modérément activés et ont produit des cytokines antivirales après En revanche, les cellules T CD ont été massivement activées, mais les cellules spécifiques du virus qui ont produit des cytokines étaient présentes chez seulement / des patients évalués. Conclusions: Infections aiguës avec une cellule présentatrice d’antigène modulée par le virus Zika. Les patients infectés par le virus de la dengue ont produit peu d’anticorps spécifiques de la dengue mais ont développé des MBC qui ont réagi de façon croisée avec le virus de la dengue. Les lymphocytes T CD fonctionnels spécifiques au virus Zika ont été facilement détectés, mais peu Des cellules T CD spécifiques aux peptides testés ont été trouvées

Zika, immunité, grossesse, persistance virale, flavivirusChaque année, des centaines de milliers de voyageurs américains reviennent des pays où l’épidémie du virus Zika a eu lieu En juillet, les voyageurs américains ont reçu un diagnostic de Zika Le syndrome de Zika chez les fœtus Les infections à ZIKV chez les adultes sont liées à des complications neurologiques rares et graves, y compris le syndrome de Guillain-Barré Des complications cardiaques ont récemment été signalées. Les réponses immunitaires à l’infection par ZIKV ont été évaluées dans un modèle de macaque , mais il y a remarquablement peu d’études humaines publiées sur des paramètres fondamentaux tels que l’ampleur, la cinétique, la qualité et la spécificité des réponses immunitaires innées, effectrices, et de la mémoire à l’immunité ZENV virus de la dengue DENV peut être un point de référence utile; cependant, ZIKV n’a qu’un seul sérotype , ce qui constitue un avantage pour le développement et le développement du vaccin ZIKV. Les études humaines du DENV ont identifié des réponses précoces de l’hôte telles que la perte de DC dendritiques myéloïdes et l’augmentation des monocytes CDCD. Après l’immunisation contre la fièvre jaune, une augmentation des lymphocytes T CDHLA-DR activés par CDHLA-DR a été détectée chez tous les receveurs du vaccin et associée à une détection transitoire de l’ARN viral plasmatique. , lorsque% -% des cellules T CD coexpriment CD et HLA-DR Ici, nous présentons la réponse immunitaire et les données de persistance virale des infections aiguës par le virus Zika

Méthodes

Les patients présentant des infections à ZIKV confirmées ont été identifiés et ont participé à un protocole approuvé par le Conseil d’examen institutionnel de l’Université d’Emory pour étudier les infections émergentes. Les points temporels de cet échantillon de convenance ont été désignés comme les jours après l’apparition des symptômes. Le diagnostic de Zika ou la persistance de ZIKV a été réalisée sur de multiples fluides corporels comme décrit . Pour le patient D, les sérums plutôt que le plasma ont été dosés ; Pour la simplicité, le mot plasma est utilisé. La souche ZIKV utilisée pour le test de neutralisation par réduction de focalisation FRNT et Zika IgM capture immuno-enzymatique par capture d’anticorps Zika MAC-ELISA PRVABC [KU] a été fournie par les centres américains pour le contrôle et la prévention des maladies. Les virus DENV-New Guinea C et DENV-H ont été fournis par BEI Resources https: // wwwbeiresourcesorg DENV-Sleman / a été fourni par Jens Wrammert L’Université Emory ZIKV a été transmise par infection aux cellules Vero American Type Culture Collection; CRL- à une multiplicité d’infection du milieu essentiel minimum sans sérum MEM; Life Technologies Gibco Après une infection de -heure à ° C, du MEM additionné de% vol / vol de sérum fœtal bovin FBS et de% antibiotique / antimycotique Corning MTCI ont été ajoutés Après observation d’un effet cytopathique sévère au jour, les surnageants ont été recueillis et centrifugés à pendant quelques minutes à ° C, le surnageant contenant le virus a été additionné d’un supplément de% vol / vol de FBS avant d’être congelé à-° C. Les virus DENV- ont également été passés comme décrit ci-dessus et les surnageants contenant le virus ont été recueillis Des essais ont été réalisés sur les IgM anti-IgM-ELISA immuno-enzymatique MAC-ELISA IgM , les stocks viraux ont été inactivés avec un% de beta-propiolactone Antigen a été produit en centrifugeant des surnageants inactivés dans des filtres Ultra-centrifuges Amicon à × g pendant minutes à ° CZIKV lysat pour des tests ELISpot à base d’enzyme immuno-liée à cellules B a été préparé à partir de cellules Vero infectées comme ci-dessus à l’arrière On a récolté le virus exempt de cellules, on a lavé deux fois les cellules adhérentes restantes et le culot cellulaire du surnageant avec une solution tamponnée au phosphate et on les a remis en suspension dans un tampon RIPA Abcam de radioimmunoprécipitation. Ab complété avec un inhibiteur de protéase Thermo Fisher Scientific; et l’inhibiteur de phosphatase Biovision; Le lysat de K-Mock a été préparé de manière similaire à partir de cellules non infectées. Les concentrations de protéine ont été quantifiées en utilisant NanoDrop. Des protéines recombinantes E de DENV-ThermoFisher ont été achetées chez CTK Diagnostics A, DENV-VN / BID-V /; A, DENV-GWL IND-; A, DENV- US / BID-V /; et A, pools de peptides DENV- pour la coloration des cytokines intracellulaires. Les essais ICS étaient constitués de -mers avec des chevauchements d’acides aminés couvrant les peptides C des protéines ZIKV, les peptides prM et les peptides E pool; pool, peptides JPT Peptide Technologies, Berlin, Allemagne; GenBank: KU Pools de peptides -mères chevauchants dérivés de ZIKV NS GenBank: KU ont été fournis par l’Université DH O’Connor du Wisconsin-Madison et synthétisés en utilisant GenScript Piscataway, New Jersey Autres méthodes expérimentales pour le phénotypage immunitaire des cellules innées par cytométrie de flux , test de neutralisation de réduction de concentration FRNT, MAC-ELISA, ELISA de WNV du virus du Nil occidental, ELISpot de cellules B, et ICS de coloration de cytokine intracellulaire sont fournis dans les matériaux supplémentaires

RÉSULTATS

Cinq voyageurs de retour avec Zika aiguë confirmée par qRT-PCR ont été recrutés entre DPOs et suivis pendant des mois. Tableau signes cliniques et symptômes inclus éruption cutanée /, myalgie /, fièvre /, fatigue prolongée /, douleurs articulaires /, et conjonctivite /; la plus résolue en semaines

Tableau Données démographiques, caractéristiques et réponses des anticorps pour les patients Zika aigus: Catégorisation en tant que Flavivirus expérimenté ou Flavivirus Naïf Âge du patient, sexe, pays visité, raison signalée Exposition antérieure au flavivirus; DPO quand ZIKV PCR Diagnosis Made Flavivirus Catégorie d’exposition État de grossesse DPO IgM MAC-ELISAa Neutralisant Ab à ZIKV et DENVs FRNT titre IgG ELISA titerb ZIKV ZIKV DENV-DENV- DENV- DENV- WNV A-, mâle, Belize, vacances Aucun; Naive NA & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; ND B-, F, Honduras, travail de mission Aucun; Naive pas enceinte & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; C-, F, Honduras, mission missionnaire au Honduras depuis et vaccin YF-D en; Expérimenté enceinte & lt; c ND ND D-, F, Jamaïque, visite de famille Originaire de Jamaïque; Expérimenté enceinte & lt; c ND ND E, F, plusieurs îles des Caraïbes, vaccin YF-D de vacances en; histoire passée des voyages prolongés dans les tropiques; YF-D expérimenté pas enceinte & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; ND Âge du patient, sexe, pays visité, raison Rapporté Exposition antérieure au flavivirus; DPO quand ZIKV PCR Diagnosis Made Flavivirus Catégorie d’exposition État de grossesse DPO IgM MAC-ELISAa Neutralisant Ab à ZIKV et DENVs FRNT titre IgG ELISA titerb ZIKV ZIKV DENV-DENV- DENV- DENV- WNV A-, mâle, Belize, vacances Aucun; Naive NA & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; ND B-, F, Honduras, travail de mission Aucun; Naive pas enceinte & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; C-, F, Honduras, mission missionnaire au Honduras depuis et vaccin YF-D en; Expérimenté enceinte & lt; c ND ND D-, F, Jamaïque, visite de famille Originaire de Jamaïque; Expérimenté enceinte & lt; c ND ND E, F, plusieurs îles des Caraïbes, vaccin YF-D de vacances en; histoire passée des voyages prolongés dans les tropiques; YF-D expérimenté pas enceinte & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; & lt; ND Abréviations: Ab, anticorps; DENV, virus de la dengue; DPO, jours après le début des symptômes; Titre de FRNT, titre de test de neutralisation de réduction de% focus; Ig, immunoglobuline; MAC-ELISA, dosage immuno-enzymatique par capture d’anticorps IgM; NA, non applicable; ND, pas fait; PCR, amplification en chaîne par polymérase; Le VNO, virus du Nil occidental; ZIKV, le test du virus Zaïm de Zika a été réalisé en utilisant des valeurs ELISA de MAC-ELISA où les densités optiques sériques des patients ont été divisées par des densités optiques sériques de contrôle saines; & lt ;, négatif; – équivoque; & gt; les titres de bIgG positifs ont été déterminés en tant que titres de point final en utilisant ELISA indirect cPour les patientes enceintes C- et D-, les DPO correspondant à la délivrance sont en gras View Large

Tableau Signes Cliniques et Symptômes des Patients Atteints d’Infection Zika Aiguë Mois et Année des Jours d’Infection Zika Post-Apparition des Symptômes à l’Insomnie Jours de Fièvre Jours de Fièvre Jours de Conjonctivite Douleurs et / ou Jours Gonflés Jours de Maux de Tête ou d’Yeux Jours de Myalgie Fatigue ou Faiblesse Nausées Jours de Diarrhée Cognitive Jours de Difficultés Notes A- Août a Bb Mai, nausée C- Mai Patient attribué fatigue à la grossesse D- Juin Maux de tête a commencé avant la maladie de Zika E- Maladie de Crohn sur prednisone intermittente Patient Mois et Année des Jours d’Infection Zika Post Début des symptômes au moment de l’admission Jours de fièvre Jours de fièvre Jours de conjonctivite Douleurs articulaires et / ou jours de gonflement Jours de mal de tête ou de douleur oculaire Jours de myalgie Fatigue ou jours de faiblesse Jours de nausée ou de diarrhée Jours de difficulté cognitive Notes A- Août a Bb Mai , nausée C- Mai Patient attribué fatigue à la grossesse D- Juin Maux de tête a commencé avant la maladie de Zika E- Mai maladie de Crohn sur la prednisone intermittente jours après l’apparition des symptômes dans le patient pré-inscription aux urgences A- avait un faible nombre de globules blancs / μL normal, – cellules / μL avec des cellules de lymphocytes absolues réduites / μL; normal, – cellules / μL, lymphocytes réactifs élevés / μL; normal, une indication d’infection virale et des cellules éosinophiles basses / μL; normal, – cellules / μL Il avait aussi une créatinine élevée mg / dL; normal, – mg / dL Ces anomalies de laboratoire se sont résolues graduellement sur plusieurs joursbAs Comme nous l’avons rapporté précédemment View LargePatient A- Un homme en bonne santé qui était flavivirus naïf et avait été en vacances à Belize Table À son retour aux États-Unis, sa maladie aiguë a commencé Tableau Il était leucopénique sur DPO avec une résolution progressive L’ARN de ZIKV était présent dans le plasma sur les DPO et avec le pic détecté sur DPO; en sperme sur DPO le seul jour évalué; dans l’urine par DPO; et dans le sang total à travers DPO Figure A et B Fatigue persisté pendant un mois

Figure Vue largeTélécharger les charges virales et phénotypiques pour les cellules innées, les cellules sécrétrices d’anticorps ASC et les cellules T activées Les lignes et les symboles solides colorés identifient les patients Zika aigus Les cercles noirs ouverts sont des données de contrôle d’axes x adultes sains pour toutes les parcelles, jours après apparition des symptômes; Axes y, amplitudes de réponse Les monocytes et les cellules dendritiques ont été contrôlés comme dans la Figure S supplémentaire, et leurs fréquences sont exprimées en pourcentages de cellules mononucléaires totales dans les ASC sanguins et les cellules T activées ont été bloquées comme dans la figure supplémentaire, l’ARN ZIKV du virus Zika dans plasma B, ARN ZIKV dans les symboles solides d’urine pour les patients ou le diamant ouvert de sang total; seul patient A- évalué dans cette étude C, CDCD intermédiaire monocytes D, myéloïde DC mDC Autres sous-ensembles monocytaires, plasmacytoïdes DC pDC et cellules tueuses naturelles NK n’ont pas montré de tendances dynamiques claires non représentées E, ASC ou plasmablastes F, cellules T CD activées G Cellules T CD activées Abréviations: ASC, cellules sécrétrices d’anticorps; Ct, seuil de cycle pour les réactions de qRT-PCR; DPO, jours après le début des symptômes; HLA-DR, antigène leucocytaire humain-D apparenté; mDC, cellules dendritiques myéloïdes; ZIKV, Zika virusFigure View largeTélécharger les charges virales et phénotypiques pour les cellules innées, les cellules sécrétrices d’anticorps ASC et les lymphocytes T activés Les symboles et lignes solides colorés identifient les patients Zika aigus Les cercles noirs ouverts sont des données de contrôle d’axes x adultes sains pour toutes les parcelles , jours après l’apparition des symptômes; Axes y, amplitudes de réponse Les monocytes et les cellules dendritiques ont été contrôlés comme dans la Figure S supplémentaire, et leurs fréquences sont exprimées en pourcentages de cellules mononucléaires totales dans les ASC sanguins et les cellules T activées ont été bloquées comme dans la figure supplémentaire, l’ARN ZIKV du virus Zika dans plasma B, ARN ZIKV dans les symboles solides d’urine pour les patients ou le diamant ouvert de sang total; seul patient A- évalué dans cette étude C, CDCD intermédiaire monocytes D, myéloïde DC mDC Autres sous-ensembles monocytaires, plasmacytoïdes DC pDC et cellules tueuses naturelles NK n’ont pas montré de tendances dynamiques claires non représentées E, ASC ou plasmablastes F, cellules T CD activées G Cellules T CD activées Abréviations: ASC, cellules sécrétrices d’anticorps; Ct, seuil de cycle pour les réactions de qRT-PCR; DPO, jours après le début des symptômes; HLA-DR, antigène leucocytaire humain-D apparenté; mDC, cellules dendritiques myéloïdes; ZIKV, les monocytes pro-inflammatoires du virus ZCDCDCDCD ont été augmentés et à leur pic détecté sur DPO lorsqu’ils ont été évalués et réduits à une valeur de référence présumée par DPO Figure C Les cellules dendritiques myéloïdes mDCs ont diminué à un nadir sur DPO et augmenté à une valeur de référence présumée par DPO. Figure A, Tableau neutralisant les anticorps NAb contre ZIKV a d’abord été détecté sur DPO, a atteint un pic sur DPO à un titre de quand l’ARN viral a été détecté sur DPO, a diminué à équivoque sur DPO et était absent sur DPO dans l’urine et le sang total étaient présents mais diminuant, et par DPO avait diminué seulement -fold à; Figure A, Tableau NAb contre DENV– et ELISA Ab contre WNV étaient négatifs chez ce patient naïf Figure B, Tableau Sur DPOs – une augmentation et une chute frappantes des cellules sécrétrices d’anticorps phénotypiques ASCs ont eu lieu, culminant à% de tous les lymphocytes B du sang E La spécificité des ASC vis-à-vis du ZIKV a été démontrée par le test ELISpot, et il n’y avait aucun patient naïf ASC-flavivirus spécifique au virus anti-virus DENV —, WNV ou virus de la fièvre jaune; Figure A Fait intéressant, les lymphocytes B mémoire MBC avec réactivité croisée contre les lymphocytes TCD activés par la figure DENV développé pic modérément sur DPO, mais les cellules T CD avaient un plateau d’activation robuste et prolongée jusqu’à% des cellules T CD totales du sang avant de diminuer Les lymphocytes T CD et CD antiviraux produisant des cytokines contre les peptides ZIKV C, prM, E et NS ont été démontrés dans des dosages ICS; d’abord détecté sur DPO et persistant à travers DPO Figure, Tableau supplémentaire S En outre,% des cellules T CD antiviraux étaient polyfonctionnelles, c’est-à-dire exprimé ≥ cytokines Figure E

Figure Vue largeDownload slideAnti-corps réponses A, sérum anti-virus Zika ZIKV immunoglobuline Ig M a été déterminée par Zika IgM anticorps-capture-enzyme immuno-enzymatique MAC-ELISA et sérum anticorps neutralisant NAb contre ZIKV par test de neutralisation réduction de concentration FRNT Les valeurs ELISA IgM étaient les rapports entre les densités optiques sériques des patients et les densités optiques sériques témoins saines; & lt ;, ligne horizontale pointillée négative inférieure dans le panneau IgM; -, équivoque; & gt ;, ligne pointillée supérieure positive La ligne horizontale en pointillés dans le panneau NAb est la coupure négative: un titre de & lt; Le titre FRNT est l’inverse de la dilution sérique à laquelle un% de réduction des foyers viraux a été observé B, Sérum NAb contre le symbole vert ZIKV et ligne ou virus de la dengue – symboles et lignes noirs dans le FRNT Note: le sujet E- antécédents de voyages prolongés sous les tropiques Abréviations: DENV, virus de la dengue; DPO, jours après le début des symptômes; FRNT, test de neutralisation de réduction de concentration; Ig, immunoglobuline; NAb, anticorps neutralisant; OD, densité optique; ZIKV, virus ZikaFigure VasteDownload slideAnti-réponses A, sérum anti-virus Zika ZIKV immunoglobuline Ig M a été déterminée par Zika IgM anticorps-capture-enzyme-immuno-enzymatique MAC-ELISA et sérum anticorps neutralisant NAb contre ZIKV par test de neutralisation réduction de concentration FRNT Les valeurs ELISA des IgM étaient les rapports entre les densités optiques sériques des patients et les densités optiques sériques de contrôle saines; & lt ;, ligne horizontale pointillée négative inférieure dans le panneau IgM; -, équivoque; & gt ;, ligne pointillée supérieure positive La ligne horizontale en pointillés dans le panneau NAb est la coupure négative: un titre de & lt; Le titre FRNT est l’inverse de la dilution sérique à laquelle un% de réduction des foyers viraux a été observé B, Sérum NAb contre le symbole vert ZIKV et ligne ou virus de la dengue – symboles et lignes noirs dans le FRNT Note: le sujet E- antécédents de voyages prolongés sous les tropiques Abréviations: DENV, virus de la dengue; DPO, jours après le début des symptômes; FRNT, test de neutralisation de réduction de concentration; Ig, immunoglobuline; NAb, anticorps neutralisant; OD, densité optique; ZIKV, virus Zika

Figure View largeTermine de téléchargement ImmunoSpot ELISpot dosés pour le virus Zika Virus ZIKV et virus de la dengue Cellules sécrétrices d’anticorps spécifiques au DENV ASCs et cellules B mémoire MBCs A, ASCs spécifiques de l’antigène ont été quantifiés en utilisant des cellules mononucléaires du sang périphérique PBMCs Pour le patient A-, les isotypes de l’immunoglobuline Ig spécifique du ZIKV; M, A et G ont été détectés chez ce patient naïf de flavivirus et chez le patient B-, également naïf de flavivirus. En revanche, chez les patients ayant un flavivirus C expérimenté, seuls des ASC de sécrétion d’IgG ont été détectés; Dans ces dosages, les niveaux absolus d’ASC ou de MBC spécifiques à ZIKV vs DENV ou MBC ne peuvent pas être directement comparés puisque l’antigène ZIKV était un lysat viral et les antigènes DENV étaient des protéines E recombinantes. Abréviations: ASC, cellules sécrétant des anticorps; DENV, virus de la dengue; DPO, jours après le début des symptômes; Ig, immunoglobuline; LOD, limite de détection; MBC, mémoire B cell; PBMC, cellule mononucléée du sang périphérique; ZIKV, Zika virusFigure View largeTélécharger la diapositive ImmunoSpot ELISpot dosés par le virus Zika ZIKV- et le virus de la dengue Les cellules sécrétant des anticorps spécifiques au DENV ASCs et les lymphocytes B mémoires MBCs A, les ASCs spécifiques de l’antigène ont été quantifiés à l’aide de cellules mononucléaires PBMCs A-, isotypes d’Ig d’immunoglobuline spécifique de ZIKV; M, A et G ont été détectés chez ce patient naïf de flavivirus et chez le patient B-, également naïf de flavivirus. En revanche, chez les patients ayant un flavivirus C expérimenté, seuls des ASC de sécrétion d’IgG ont été détectés; Dans ces dosages, les niveaux absolus d’ASC ou de MBC spécifiques à ZIKV vs DENV ou MBC ne peuvent pas être directement comparés puisque l’antigène ZIKV était un lysat viral et les antigènes DENV étaient des protéines E recombinantes. Abréviations: ASC, cellules sécrétant des anticorps; DENV, virus de la dengue; DPO, jours après le début des symptômes; Ig, immunoglobuline; LOD, limite de détection; MBC, mémoire B cell; PBMC, cellule mononucléée du sang périphérique; ZIKV, virus Zika

Des ASC spécifiques du ZIKV ont été identifiés avec ELISpot, mais aucun ASC spécifique au DENV n’était présent chez ce patient naïf. Figure A Des lymphocytes T effectrices CD spécifiques à la cytokine sécrétant E, mais pas de lymphocytes T CD, étaient présents Tableau supplémentaire SPatient C – Une missionnaire expérimentée de flavivirus au Honduras a été enceinte de plusieurs semaines quand elle a développé Zika Table Arthralgia a persisté pendant un mois; des maux de tête et de la fatigue étaient présents par DPO, mais elle a attribué la fatigue à la grossesse. Tableau L’ARN du virus ZIKV était positif à partir du DPO et est devenu négatif sur le DPO Figure A; Le plasma était négatif pour le DENV et l’ARN du chikungunya. Les PCR urinaires étaient positives pour l’ARN du virus ZIKV sur les DPO et non pas après que le plasma amniotique et le sang ombilical aient été négatifs, tout comme la culture virale du placenta. Le phénotypage cellulaire révèle une augmentation transitoire des monocytes pro-inflammatoires Figure C et une diminution des CDM Figure D Anti-ZIKV IgM est initialement négative DPO, haute équivoque sur DPO, puis positive par DPO, et négative à la délivrance DPO; Tableau Sur DPO, NAb spécifique au DENV a été détecté dans le sérum Figure A et B, Tableau, mais NAb anti-ZIKV n’a pas été détecté jusqu’à DPO, puis a atteint un pic sur DPO lorsque les taux plasmatiques d’ARN ZIKV ont commencé à diminuer. longue durée de vie; par exemple, sur les titres de DPO FRNT étaient et [DENV-], ASCs phénotypiques respectivement avaient un pic de DPO robuste% de toutes les cellules B du sang; Figure E Comme NAb, des ASC produisant des IgG spécifiques de DENV ont été détectées sur DPO en utilisant ELISpot et plus tard des ASC spécifiques de DPO ZIKV ont été détectés. Figure A Comme attendu, MBC contre ZIKV et tous les sérotypes de DENV ont été détectés; Figure BModerate CD T-activation des cellules Figure F et cellules T CD spécifiques antigène fonctionnelles contre les peptides C, prM, E, et NS étaient présents Figure A et D Forte activation des cellules T CD% du sang total Les lymphocytes T CD ont été détectés tôt DPO; Figure G et persisté en association avec l’ARN viral plasmatique prolongé Figure A Cependant, les cellules T CD productrices de cytokines fonctionnelles n’étaient pas détectées contre les peptides C, prM et E ou présentaient à des niveaux très faibles NS dans les tests ICS effectués à plusieurs reprises par DPO Figure B et D; Tableau supplémentaire S Phénotypage du sous-ensemble de lymphocytes T CD activés mais apparemment hypofonctionnels identifiés comme étant des fonctions effectrices, proliférantes et cytotoxiques dirigées contre l’antigène, indiquant une activation par le récepteur TCR des lymphocytes T et non par l’activation du spectateur. Une résidente américaine expérimentée, en bonne santé et en état de grossesse a voyagé en Jamaïque pour rendre visite à un parent. Peu de temps après son retour aux États-Unis, elle a développé un Zika aigu pendant la seizième semaine de gestation. sa maladie de Zika ZIKV ARN était présent dans le plasma sur les DPO et non détecté sur DPO Figure A qRT-PCR était négatif pour DENV et chikungunya ARN dans le plasma, ZIKV ARN dans l’urine et ZIKV ARN dans le DPO du liquide amniotique Le nouveau-né est apparu sain et avait Elle est restée telle pendant des mois. Parce que sa première visite d’étude s’est produite plus tard DPO, monocyte, mDC, et le phénotypage ASC n’a pas identifié les changements aigus obs Figure C-E L’IgM anti-ZIKV était positive par DPO; équivoque sur les OPH, et par livraison; et négatif sur la figure A du DPO, les titres du FRNT du Tableau élevé par rapport au ZIKV et au DENV étaient présents sur DPO, par exemple, contre ZIKV et persistaient Figure A-B, Tableau ELISpot ASC spécifique à l’antigène sur DPO était pic manqué négatif; Figure A MBC contre ZIKV et DENV étaient présents sur DPOs, et Figure BCD activation des cellules T n’a pas été observée plus tard point de temps initial [DPO]; Figure F, mais les cellules T CD ont été activées et sont restées ainsi via DPO lorsque l’ARN viral plasmatique est devenu négatif. Figure G Des cellules T CD productrices de cytokines antivirales ont été détectées par ICS; Cependant, chez cette patiente enceinte avec un ARN viral prolongé dans le plasma, les lymphocytes T CD fonctionnels contre les peptides C, prM, E et NS n’ont pas été détectés Figure, Tableau Supplémentaire Patient E- Une femme non enceinte âgée a développé un Zika aigu à son retour. les États-Unis des Caraïbes; elle a déjà reçu le vaccin YFV-D et elle avait également des antécédents de voyage prolongé sous les tropiques. Les tableaux et sur l’ARN du DPO ZIKV ont été détectés dans l’urine mais pas dans le plasma; Figure AB Le phénotypage des populations de monocytes, de CDM, d’ASC et de lymphocytes T activés a montré des augmentations et des diminutions comme pour les autres patients. La Figure C-G était positive pour les DPO et négative pour la DPO. Les titres de NAb contre ZIKV étaient élevés et contre DENV étaient faibles. Figure A-B, Essais de Tableau ELISpot pour les cellules spécifiques de ZIKV et de DENV identifiées par ASC et MBC Figure Elle produisait des cellules T effectrices fonctionnelles contre ZIKV C, prM, E et / ou NS peptides à un sous-ensemble de CD modéré ou à un sous-ensemble de CD faible Figure, Tableau supplémentaire S

DISCUSSION

tectés chez / patients testés, à l’exclusion des co-infections Malgré l’ARN viral persistant dans le plasma, les femmes enceintes ont développé des réponses phénotypiques innées, lymphocytaires T et B robustes; les réponses des lymphocytes T CD spécifiques de l’antigène; Les titres de NAb étaient similaires à ceux des patients non gestants. Les deux femmes ne présentaient pas de réponses fonctionnelles détectables des lymphocytes T CD contre les peptides protéiques de structure du ZIKV. Leur ARN de plasma prolongé était vraisemblablement dû à une excrétion du placenta infecté [ Aucun DPD clair n’a été observé pour d’autres sous-ensembles monocytaires, plasmocytoïdes DC pDC ou cellules tueuses naturelles NK La connaissance de ces changements cellulaires au cours d’une infection aiguë par le virus Zika peut conduire à des voies métaboliques. à exploiter pour le vaccin ou le développement thérapeutique Des augmentations des monocytes intermédiaires CDCD ont également été observées chez les patients atteints de dengue aiguë avec des charges virales élevées, et cette population de cellules a été démontrée in vitro pour favoriser la différenciation plasmablast et la production d’anticorps par le facteur d’activation des cellules B ligand inducteur de prolifération APRIL et interleukine IL-A de plis dans les hémodialyses a été décrit pour les infections à DENV où les DC sont un site majeur pour la réplication virale avec apoptose résultante ZIKV, comme de nombreux flavivirus, infecte les DC humaines ZIKV antagonise les réponses interféron DC in vitro Forte activation de CD T cellules% à% du nombre de lymphocytes T CD se sont développés précocement et ont persisté parallèlement à l’ARN viral Activation modérée des lymphocytes T CD% -% survenus Des niveaux inférieurs, similaires et supérieurs d’activation des lymphocytes T ont été rapportés pour YFV-D, DENV , et les infections aiguës Ebola, respectivement [,,] Quatre patients étudiés avant DPO avaient des réponses ASC phénotypiques robustes jusqu’à% des cellules B sanguines Chez les patients expérimentés avec les flavivirus, ASCs contre ZIKV et DENV étaient présents; Dans les patients expérimentés, ASC et NAb à DENV sont apparus plus tôt que ceux au ZIKV, soulignant que les tests NAb seuls ne peuvent pas être utilisés pour le diagnostic du virus ZIKV chez les patients avec flavivirus. patients Titres d’anticorps neutralisants spécifiques du ZIKV et / ou du DENV ont une longévité impressionnante, par exemple DPO, patient C-, titre, comme cela a été rapporté pour d’autres flavivirus Les MBC spécifiques au ZIKV étaient plus élevés chez les patients naïfs de flavivirus Le développement de MBC ayant une réactivité croisée au DENV après Zika chez un patient naïf du DENV, par exemple le patient A, soulève une possibilité théorique d’amélioration dépendante des anticorps lors d’une première infection à DENV chez ces patients ou pour le vaccin ZIKV. destinataires De plus amples études sont nécessaires pour répondre à ces observations. En plus des rapports de cas que nous avons publiés récemment , nous n’avons pas été en mesure d’identifier les publications sur les tests ICS au cours du Zika humain. Les cellules T CD exprimant les cytokines C-, prM-, E- et NS spécifiques se sont développées chez tous les patients testés, et% -% des cellules répondantes étaient polyfonctionnelles. Figure E Détection généralement absente ou faible des cellules T effectrices CD fonctionnelles Les études sur de plus grands échantillons et avec des peptides couvrant toutes les protéines ZIKV sont nécessaires. Les hautes fréquences des lymphocytes T CD activés par rapport à l’amplitude absente ou faible de la fonction fonctionnelle. Dans les infections virales persistantes, par exemple le virus de l’immunodéficience humaine, le virus de l’hépatite C, le virus de la chorioméningite lymphocytaire et le cancer, l’exposition chronique aux antigènes dysfonctionnement de l’épuisement cellulaire Dans notre étude, les lymphocytes T CD hautement activés portaient des marqueurs d’exposition à l’antigène via TCR, ce qui plaide contre l’activation spectateur, mais peu de cellules T CD spécifiques pour les peptides testés w Dans une étude sur des patients atteints de dengue, la grande majorité des cellules T CD effectrices hautement différenciées et proliférantes avaient acquis une réfractarité TCR avec une production de cytokines déficiente. Les transcriptomiques révélaient une régulation négative des molécules de signalisation TCR , amenant les auteurs à déduire l’activation cellulaire conduit à une régulation négative de la signalisation TCR, produisant un phénotype étourdi précédemment décrit pour d’autres virus En outre, avec d’autres flavivirus, les protéines structurales sont principalement ciblées par CD plus que les cellules T CD réponse de la cellule dans la grossesse observée ici mérite une étude plus approfondie Enfin, la signification de la persistance de l’ARN du virus ZIKV dans les fluides corporels doit être confirmée par une culture ou des essais moléculaires qui quantifient le virus de la réplication dans la littérature clinique ZIKV. Les résultats cliniques, viraux et immunologiques de cette petite série de Zika patie Les nts peuvent présenter un intérêt particulier pour les cliniciens et les scientifiques qui planifient des études de vaccins.

Données supplémentaires

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Remarques

Remerciements Les auteurs remercient les volontaires de l’étude pour leur généreuse participation. Pour des discussions scientifiques utiles, nous remercions Toby Merlin, Walla Dempsey, Robert Johnson, Jens Wrammert, Mehul Suthar et Rafi Ahmed. Merci à Jesse Waggoner Département de la santé publique; et les contributions cliniques de Lara Harik, John P Horton et Martina Badell des départements de pathologie, d’obstétrique et de gynécologie et de médecine maternelle et fœtale de l’Université Emory. L’équipe d’étude Emory Zika comprend les co-auteurs et les personnes suivantes: Briyana Domjahn, MPH, Dongli Wang, BS, Mary Bower, RN, Rijalda Deovic, BS, Sree Aramgam, BS, Sara Jo Johnson, BS, Dean Kleinhenz, BS, JoAnn Sadowski, BS, Talib Sirajud-Deen, BA de Hope Clinic du Emory Vaccine Center , Division des maladies infectieuses, Département de médecine, Faculté de médecine, Université Emory, Decatur, Géorgie, et Jesse Waggoner, MD de Hope Clinic du Emory Vaccine Centre, Division des maladies infectieuses, Département de médecine, Faculté de médecine, Université Emory , Decatur, Georgia et Emory TravelWell Center, Division des maladies infectieuses, Département de médecine, Faculté de médecine, Université Emory, Atlanta, Géorgie Soutien financier Ce travail a été soutenu par l’Emory Unive École de Médecine de la Santé; Emory Vaccine Centre; Georgia Research Alliance; et le National Institutes of Health NIH, Institut national des allergies et des maladies infectieuses NIAID, Division de la microbiologie et des maladies infectieuses DMID; contrat HHSNI et par une subvention supplémentaire à la subvention NIH / NIAID / DMID AIPotential conflits d’intérêts HW a reçu une subvention de Takeda Vaccines, en dehors du travail soumis Tous les autres auteurs: Aucun conflit d’intérêt signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation de Conflits d’intérêts potentiels Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués